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存儲在FTA采血卡上的死后血液中的DNA質量和數(shù)量高達16年
保存在FTA采血卡上的血液樣本為基因研究提供了獨特的機會。從這些采血卡中回收的DNA應該長時間保持穩(wěn)定。然而,由于在相當長的時間內存儲在FTA卡上的DNA在法醫(yī)或基因組DNA分析方面的要求有多好,特別是對于質量因初次收集而有所不同的死后樣本,因此尚不完善。這項研究的目的是評估從16歲以上的死后血腥FTA采血卡中提取的DNA質量和數(shù)量的時間依賴性降解。收集來自1998年至2013年的8個時間點的四個隨機FTA樣品并一式三份提取。用Quantifiler(?)Human Plus(HP)Quantification試劑盒測定提取的DNA樣品的數(shù)量和質量。通過比較回收的DNA產量來評估內部樣品和樣品與樣品的變化。隨后將來自一式三份樣品的DNA組合并標準化用于進一步分析。從具有法醫(yī)學和藥物遺傳學靶標記的標準化樣品評估降解對DNA質量的實際影響。我們的研究結果表明:(1)PM變化,例如采樣前的血液凝固,會影響回收的DNA產量,從而產生內部和樣品間的變異; (2)觀察到FTA卡儲存時間與DNA量之間呈負相關(r = -0.836,處于0.01水平); (3)在FTA卡存儲時間和降解水平之間發(fā)現(xiàn)正相關(在0.01水平r = 0.738)。但是,使用的方法沒有觀察到抑制。
功能應用清楚地表明了降解的影響。盡管獲得了所有樣品的完整STR-譜,但有證據(jù)表明降解表現(xiàn)為較大尺寸擴增子中峰高的降低。使用大的5.1kb CYP2D6基因片段顯著降低擴增成功,該片段強烈支持儲存樣品的降解。根據(jù)我們的結果,存儲在FTA卡上的DNA在很長一段時間內相當穩(wěn)定。從該存儲介質中提取的DNA可以用作人類鑒定目的,因為所使用的方法足夠敏感并且擴增子大小傾向于<400bp。然而,DNA完整性在儲存期間受到影響。應根據(jù)預期應用考慮這種影響,特別是如果需要高質量的DNA和長PCR擴增子。